L'imaging cellulare in diretta richiede microscopiCiò minimizza la fototossicità, mantengono la vitalità cellulare e fornisce imaging ad alta risoluzione nel tempo. Le scelte comuni includono:
1. Microscopi a fluorescenza invertiti:
Microscopi a livello largo: dotati di controlli ambientali (temperatura, CO₂, umidità) e telecamere sensibili (ad es. SCMOS). Spesso abbinato a contrasto di fase o DIC (contrasto di interferenza differenziale) per imaging senza etichetta.
Confocal di rotazione del disco: riduce il fotobleaching con una scansione più rapida rispetto alla tradizionale scansione laser confocale. Ideale per processi dinamici.
2. Microscopia a fluorescenza in lamiera leggera (LSFM):
Illumina solo il piano focale, riducendo drasticamente l'esposizione alla luce e consentendo l'imaging a lungo termine (ad esempio ore a giorni).
3. Microscopia a due fotoni:
Utilizza la luce del vicino infrarosso per una penetrazione dei tessuti più profondi e una ridotta fototossicità, adatta a campioni spessi come colture 3D.
4. TIRF (fluorescenza totale di riflessione interna):
Visualizzare gli eventi almembrana cellulare(ad esempio, traffico di vescicole) imaging una sezione ottica sottile (~ 100 nm).
5. Microscopi per super risoluzione (ad es. STED, SIM):
Ottenere una risoluzione maggiore ma richiedono un'attenta ottimizzazione per bilanciare l'esposizione alla luce e la salute delle cellule.
6. Sistemi ottimizzati con cellule live:
Incorporare camere ambientali, ottica adattiva e rilevatori in condizioni di scarsa illuminazione (ad es. Telecamere EM-CCD).
Caratteristiche chiave per Imaging Live:
- Controllo ambientale: mantiene temperatura, CO₂ e umidità.
- Acquisizione rapida: minimizza la sfocatura del movimento per i processi dinamici.
- Bassa fototossicità: filtri, fonti di luce a LED o illuminazione del foglio di luce riducono i danni.
Scegli in base alle esigenze di risoluzione, alla durata dell'imaging e alla sensibilità del campione.
